Vakuole v spermijih so predeli brez kromatina in lahko kažejo na kromosomsko ali DNK napako v spermijih. V naši raziskavi smo želeli ugotoviti, ali vakuole v spermijih vplivajo na dogodke v zgodnjam razvoju zarodkov pred implantacijo v maternico. Spermije za injekcijo v citoplazmo jajčne celice smo pod 6000-kratno povečavo razdelili v štiri kategorije, nato smo zgodnje zarodke opazovali s time-lapse mikroskopijo. Zarodki, ki so nastali po injekciji z normalnimi spermiji 1. razreda, brez vakuol, so dosegli 4-celično stopnjo signifikantno hitreje, kot tisti zarodki, po injekciji s spermiji 4. razreda z velikimi vakuolami in drugimi nepravilnostmi (P = 0,012). Blastociste so se tudi najhitreje razvile po injekciji s spermiji 1. razreda. Kromosomske napake spermijev in napake na njihovi DNK imajo najverjetneje vpliv na zgodnji razvoj zarodkov. Naša raziskava je pokazala, da izbor spermijev z normalno morfologijo in brez vakuol pod veliko povečavo lahko izboljša razvoj zgodnjih zarodkov pri bolnikih s slabo morfologijo spermijev. V naši raziskavi smo dinamiko razvoja zgodnjih zarodkov prvič podrobno opazovali pod mikroskopom po uporabi morfološko izbranih spermijev.
COBISS.SI-ID: 903596
Razvoj objektivnega in zanesljivega testa, s pomočjo katerega bi lahko v postopkih zunajtelesne oploditve (ZTO) izbrali zarodek z največjo možnostjo za ugenzditev in nosečnost, ostaja pomemben cilj reporduktivne medicine. Do sedaj so že bili predlagani različni geni, ki se izražajo v celicah kumulusa (KC), in naj bi služili kot biooznačevalci nosečnosti, vendar le-ti večinoma niso bili potrjeni na neodvisni skupini vzorcev. Cilj naše raziskave je bilo z metodo verižne reakcije s polimerazo (qPCR) analizirati izražanje genov EFNB2, RGS2 in VCAN, ki so bili predlagani kot biooznačevalci nosečnosti. Izražanje teh genov smo analizirali v 43 posameznih vzorcih KC, ki smo jih pridobili od 43 preiskovank. Pri vseh preiskovankah smo uporabili enak protokol za spodbujanje jajčnikov in elektivni prenos enega zarodka. Izražanje genov RGS2 in VCAN se med vzorci KC, katerih zarodki so se ugnezdili, in tistimi, ki se niso, ni razlikovalo. Izražanje gena EFNB2 je bilo mejno višje v KC, katerih zarodki se niso ugnezdili. Ta rezultat je nasproten od drugih raziskav, kjer je bilo izražanje EFNB2 večje v KC, katerih zarodki so se ugnezdili. V naši raziskavi nismo potrdili rezultatov prejšnjih raziskav, v katerih so bili geni EFNB2, RGS2 in VCAN predlagani kot biooznačevalci nosečnosti.
COBISS.SI-ID: 1995948
Pri postopkih zunanje telesne oploditve (ZTO) je nadzorovano prekomerno spodbujanje jajčnikov doseženo z gonadotropini v kombinaciji z agonisti ali antagonisti gonadoliberinov, kateri preprečijo spontani vrh luteinizirajočega hormona (LH). Namen naše raziskave je bil izboljšati razumevanje profila izražanja genov kumulusnih celic (KC) glede na uporabljeno zdravljenje spodbujanja jajčnikov in zrelosti jajčne celice. Uporabili smo Affymetrix mikromreže za analizo izražanja genov v KC različno zrelih jajčnih celic, pridobljenih v postopkih ZTO z agonisti ali antagonisti gonadoliberinov. Opravljene sta bile dve analizi: v prvi smo primerjali KC nezrelih metafaza I (MI) in KC zrelih metafaza II (MII) jajčnih celic, kjer je bilo 359 različno izraženih genov in druga, kjer smo opravili primerjavo KC glede na uporabljen analog gonadoliberinov. ni bilo Na nivoju celotnega transkriptom ni bilo različno izraženih genov. Opravili smo dodatno analizo 359 različno izraženih genov, s poudarkom na anti-Müllerjevem hormonskem receptorju 2 (AMHR2), folikel spodbujajočim hormonskim receptorjem (FSHR), žilnim endotelijskim rastnim dejavnikom C (VEGFC) in serin proteaznim inhibitorjem E2 (SERPINE2). Med drugimi različno izraženimi geni smo opazili številne nove gene povezane s celično povezavo in neurotransmiterji, kot dopamin, glicin in γ-aminobutirična kislina (GABA). V klinični raziskavi ni bilo signifikantnih razlik v izražanju genov KC v primerjavi med analogoma gonadoliberinov, kar podpira izsledke v enaki stopnji živorojenih otrok med analogoma gonadoliberinov.
COBISS.SI-ID: 432044
Namen: Namen naše raziskave je bil ali obstajajo razlike v izražanju genov kumulusnih celic zrelih jajčnih celic med modificiranim spontanim postopkom in postopkom z nadzorovanim prekomernim spodbujanjem jajčnikov. Namen je bil tudi, ali tovrstne razlike v izražanju genov kumulusnih celic lahko pomagajo razumeti zakaj imajo modificiran spontani postopek nižjo stopnjo uspešnosti. Metode: Kumulusne celice zrelih jajčnih celic, ki so se razvile do stopnje morule ali blastociste na 5. dan po pridobitvi jajčnih celic, smo analizirali z mikromrežami. Pridobljene rezultate smo validirani s PCR v realnem času. Rezultati: 66 genov je bilo različno izraženih med kumulusnimi celicami modificiranih naravnih postopkov in postopkih zunanje telesne oploditve z nadzorovanim prekomernim spodbujanjem jajčnikov. Analiza genske ontologije je pokazala kot značilno obogatene pri modificiranem naravnim postopkom poti oksidacijsko redukcijskih procesov, glutation metabolnega procesa, ksenobiotičnega metabolnega procesa in gensko izražanje. Med različno izraženimi geni je bila tudi velika skupina malih nukleolarnih RNK (angl. small nucleoar RNAs), čigar vloga v folikulogenezi še ni bila pojasnjena. Zaključki: Povišano izražanje genov vpletenih v oksidacijsko redukcijske procese najverjetneje nakazuje na hipoksične pogoje v modificiranih naravnih postopkih. Te ugotovitve odprejo možnost, da imajo oksidacijsko redukcijski procesi odločujočo vlogo pri uspehu modificiranega naravnega postopka.
COBISS.SI-ID: 1121708