1.

Stefin B interagira s histoni in katepsinom L v jedru.

Identificirali smo interakcijo stefina B z histoni. Pokazali smo, da povečano izražanje stefina B v jedru vpliva na procesiranje CUX 1 transkripcijskega faktorja. Kot posledico manjše cepitve CUX 1, smo v celicah v katerih je bil stefin B še dodatno izražen v jedru, izmerili počasnejši potek celičnega cikla. Z uporabo FRET metode smo potrdili interakcijo stefina B z krajšo varianto katepsina L v jedru živih celic.

COBISS.SI-ID: 23338023

2.

Klasična ne pa alternativna aktivacija makrofagov vodi v povečano lokalizacijo SpiA3g v jederce celic.

Ob klasični aktivaciji makrofagov je izražanje serpina A3G (SpiA3G) izrazito povišano. Pokazali smo povečano lokalizacijo SpiA3G, ter ko lokalizacijo z katepsinom L v jedercu makrofagov ob klasični, ne pa tudi alternativni aktivaciji makrofagov. Ker samo stimulacije z pro-vnetnimi, ne pa tudi proti-vnetnimi citokini privedejo do povečanega izražanja SpiA3G v jedercu, lahko sklepamo, da je translokacija SpiA3G v jederce pomembna pri obrambi organizma pred patogeni

COBISS.SI-ID: 23524135

3.

Interakcija oligomer stefina B in amiloida-beta (peptid v AD)

Z uporabo tehnik SPR in ESI MS smo uspeli pokazati, da tetrameri stefina B in prepleteni dimeri variante Y31-stefina B interagirajo z amiloidom-beta (ki se nabira v AD). Novo je, da je ta interakcija specifična za točno določene oligomere nasproti monomeru. Nadalje smo pokazali, da oligomeri stefina B inhibirajo rast fibril amiloida-beta, tako in vitro kot zelo verjetno tudi v celicah. Seveda je takšna interakcija lahko zanimiva za morebitno terapijo AD.

COBISS.SI-ID: 2152783

4.

Študije s konfokalno in elektronsko mikroskopijo znotrajceličnih agregacij stefina B

Pokazali smo, da endogeni stefin B tvori manjše, citoplazmatske agregate ter, da inhibicija proteasoma pripelje do povečanja količine endogenega proteina v celici, vendar tudi do večje agregacije stefina B. Z konfokalno mikroskopijo smo ugotovili, da so agregati stefina ko-lokalizirani z markerjema autofagije LC3 in p62. Delno ko-lokalizacijo agregatov stefina B pa smo opazili z ubikvitinom ter podenotami proteasoma S20 in S26, kakor tudi z komponentami citoskeleta.

COBISS.SI-ID: 23321639

5.

POdobna toksičnost prefibrilarnih ologomer in zazvitega klopčiča (molten globule) proteina

Sodelavci na projektu so pokazali, katera konformacija stefina B je toksična. Izkazalo se je, da že malo odvito stanje nativnemu podobnega intermediate, ki tvori oligomere in v okviru napake enako toksična (čeprav bi pričakovali, da bo bolj toksična) pa konformacija razrahljanega klopčiča – molten globule. Ta ugotovitev verjetno velja tudi splošnejše, saj so podobno pokazali za prion.

COBISS.SI-ID: 21386023