1.

Strukturni model proteinskega kompleksa med kalmodulinom in sekretorno fosfolipazo A2

Nevrotoksična sekretorna fosfolipaze A2, amoditoksin, se z visoko afiniteto veže na kalmodulin (CaM), kar vodi v njegovo stabilizacijo v redukcijskih pogojih in dvig encimske aktivnosti tako v redukcijskih kot tudi v neredukcijskih pogojih. Zgradili smo energetsko najbolj ugoden model kompleksa, s katerim smo na strukturni ravni razložili omenjene opažene učinke. Na osnovi modela smo predlagali, da strukturno podobne sesalske sPLA2 skupin V in X, ne pa IB in IIA, tvorijo stabilni kompleks, kar naj bi tudi vodilo v povišanje njihove encimske aktivnosti. To smo tudi eksperimentalno potrdili.

COBISS.SI-ID: 23512103

2.

Bakterijsko izražanje in enostavno čiščenje človeške sekretorne fosfolipaze A2 skupine X

V članku smo opisali razvoj našega učinkovitega ekspresijskega sistema bakterije Escherichia coli, kot tudi in vitro renaturacijo in enostaven postopek čiščenja, ki omogoča donos do 10 mg človeške sPLA2-X na liter kulture. Za razliko od naravnega proteina je bil rekombinantni encim pridobljen v bakterijskih celicah brez N-terminalnega propeptida, tj. kot zrel protein, in ni bil N-glikoziliran, je pa zadržal vse encimske lastnosti pri hidrolizi vezikularnih substratov s fosfatidilglicerolom ali fosfatidilholinom.

COBISS.SI-ID: 24268839

3.

Sekretorne fosfolipaze A2 ter njihova fiziološka in patofiziološka vloga

Pri sesalcih je bilo doslej prepoznanih 29 fosfolipaz A2, ki delujejo znotraj- in/ali zunajcelično. Večino slednjih predstavljajo sekretorne fosfolipaze A2, ki so kot encimi ali ligandi za različne receptorje vpletene v številne fiziološke in patološke procese. To je spodbudilo farmacevtska podjetja k intenzivnemu razvoju specifičnih inhibitorjev za lajšanje, preprečevanje in zdravljenje obolenj, povezanih s sekretornimi fosfolipazami A2, kot so npr. vnetja, ateroskleroza, nevrodegenerativna in rakava obolenja.

COBISS.SI-ID: 21552167

4.

Kalmodulin deluje kot neesencialni aktivator sekretornih fosfolipaz A2

Kalmodulin stabilizira konformacijo nevrotoksične sekretorne fosfolipaze A2 skupine IIA, amoditoksina, in hkrati poviša njeno encimsko aktivnost. Dobljeni rezultati ne dajejo le vpogleda v nevrotoksično delovanje amoditoksinov, temveč tudi v mehanizme, ki so vključeni v regulacijo delovanja strukturno podobnih sesalskih sPLA2, kot npr. skupin V in X, v citosolu.

COBISS.SI-ID: 23138087