Razvoj PCR v realnem času za kvantitativno določanje virusov pri postopku čiščenja z monolitnimi kromatografskimi nosilci (CIM)

Izolacija in koncentriranje virusov iz rastlinskega materiala je dolgotrajen in zahteven postopek, ki bi ga lahko s uporabo določenih kromatografskih tehnik skrajšali in poenostavili. Predhodne raziskave so pokazale, da so CIM(R) monolitni kromatografski nosilci primerni za čiščenje, ločevanje in koncentriranje rastlinskih virusov. Virusne delce smo koncentrirali iz zelo razredčenih vzorcev, v katerih jih z metodo ELISA ali PCR, ni bilo moč dokazati. Uporaba monolitnih nosilcev bi torej bila smiselna v primeru namakalnih voda, iz katerih bi se lahko virusi koncentrirali in kasneje določili s serološko ali molekularno metodo. Projekt, ki ga prijavljamo, je logično nadaljevanje začetega dela. Pri delu bomo uporabljali dva modelna rastlinska virusa. Z uporabo zelo občutljive molekularne metode PCR v realnem času, ki jo bomo razvili za modelna virusa, bomo skušali uvesti postopek kvantifikacije na vzorcih koncentriranih na CIM(R) monolitnih kromatografskih nosilcih. Optimizirali bomo pogoje ločevanja in koncentriranja na omenjenih nosilcih in po potrebi tudi same nosilce. Optimizirane postopke bomo uporabili za ugotavljanje prisotnosti rastlinskih virusov v naravnih vodotokih. Uporaba natančnih molekularnih metod detekcije in kvantifikacije rastlinskih virusov bo pomembno prispevala k spoznavanju lastnosti monolitnih kromatografskih nosilcev oz. olajšala bo študij interakcije le-teh z virusi. Ta spoznanja bodo omogočila uporabo CIM monolitnih kromatografskih nosilcev še na drugih področjih virologije.